可見(jiàn)分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸、蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量?;驹恚悍肿拥淖贤饪梢?jiàn)吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后,發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜,反映了分子中某些基團(tuán)的信息,可以用標(biāo)準(zhǔn)光譜圖再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。朗伯-比爾定律:當(dāng)一束平行單色光通過(guò)含有吸光物質(zhì)的稀溶液時(shí),溶液的吸光度與吸光物質(zhì)濃度、液層厚度乘積成正比,即A=kcl式中比例常數(shù)k與吸光物質(zhì)的本性,入射光波長(zhǎng)及溫度等因素有關(guān)。c為吸光物質(zhì)濃度,l為透光液層厚度。
可見(jiàn)分光光度計(jì)正常工作的環(huán)境要求如下:
?。?)避開(kāi)高溫高濕環(huán)境。請(qǐng)不要將儀器安裝在高溫高濕的環(huán)境下。儀器必須在5℃~35℃度溫度、≤85%的濕度條件下安裝使用。
?。?)避免儀器受外界磁場(chǎng)干擾。請(qǐng)盡量遠(yuǎn)離發(fā)出磁場(chǎng)、電場(chǎng)、高頻波的電器裝置。
?。?)遠(yuǎn)離腐蝕氣體。請(qǐng)不要將儀器安裝在空氣中氯氣、鹽酸氣體、硫化氫氣體、亞硫酸氣體等腐蝕性氣體超標(biāo)場(chǎng)所。
?。?)儀器應(yīng)放置在穩(wěn)定的工作臺(tái)上。放置儀器的工作臺(tái)應(yīng)水平、穩(wěn)定、不能有振動(dòng);儀器的風(fēng)扇附近應(yīng)留有足夠的空間,使其排風(fēng)順暢。
?。?)不要與其他用電設(shè)備共用電源插座。請(qǐng)為儀器單獨(dú)設(shè)計(jì)一個(gè)電源插座,不要與其它用電設(shè)備共用,電源應(yīng)具備保護(hù)地線。
?。?)不要將儀器放置在陽(yáng)光直接照射的地方。
?。?)避免灰塵多環(huán)境。
可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用方法:
1、在接通電源之前,電表的指針必須位于“0”刻線上,否則應(yīng)旋動(dòng)電表上的校正螺絲調(diào)節(jié)到位。
2、打開(kāi)比色皿室的箱蓋和電源開(kāi)關(guān),使光電管在無(wú)光照射的情況下預(yù)熱15分鐘以上。
3、旋轉(zhuǎn)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器,選擇測(cè)定所需的單色光波長(zhǎng)。選擇適當(dāng)?shù)撵`敏度,一般先將靈敏度旋鈕至中間位置,用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)電表指針至T值為0%處。若不能調(diào)到,應(yīng)適當(dāng)增加靈敏度。
4、放入空白溶液和待測(cè)溶液,使空白溶液置于光路中,蓋上比色皿室箱蓋,使光電管受光,調(diào)節(jié)光量調(diào)節(jié)旋鈕使電表指針在T值為100%處。
5、打開(kāi)比色皿室箱蓋(關(guān)閉光門(mén)),調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)旋鈕使針在T值為0%處,然后蓋上箱蓋(打開(kāi)光門(mén)),調(diào)節(jié)光量調(diào)節(jié)旋鈕使指針在T值為100%處。如此反復(fù)調(diào)節(jié),直到關(guān)閉光t0=ITI門(mén)進(jìn)和打開(kāi)光門(mén)時(shí)指針?lè)謩e指在T值為0%和100%處為止。
6、將待測(cè)溶液置于光路中,蓋上箱蓋,由此時(shí)指針的位置讀得待測(cè)溶液的T值或A值。
7、測(cè)量完畢后,關(guān)閉開(kāi)關(guān)取下電源插頭,取出比色皿洗凈擦干,放好。蓋好比色皿暗箱,蓋好儀器。